Kiitos vierailustasi Nature.comissa.Käyttämässäsi selainversiossa on rajoitettu CSS-tuki.Parhaan kokemuksen saamiseksi suosittelemme käyttämään päivitettyä selainta (tai poistamaan Yhteensopivuustila käytöstä Internet Explorerissa).Sillä välin varmistaaksemme jatkuvan tuen hahmonnamme sivuston ilman tyylejä ja JavaScriptiä.
Useimmat aineenvaihduntatutkimukset hiirillä suoritetaan huoneenlämmössä, vaikka näissä olosuhteissa, toisin kuin ihmiset, hiiret kuluttavat paljon energiaa sisäisen lämpötilan ylläpitämiseen.Tässä kuvataan normaalipainoinen ja ruokavalion aiheuttama liikalihavuus (DIO) C57BL/6J-hiirillä, joita ruokittiin chow chow -ruokavaliolla tai 45 % rasvaisella ruokavaliolla.Hiiret sijoitettiin 33 päiväksi 22, 25, 27,5 ja 30 °C:seen epäsuoraan kalorimetriajärjestelmään.Osoitamme, että energiankulutus kasvaa lineaarisesti 30 °C:sta 22 °C:seen ja on noin 30 % suurempi 22 °C:ssa molemmissa hiirimalleissa.Normaalipainoisilla hiirillä ruoan nauttiminen vaikutti EE:hen.Sitä vastoin DIO-hiiret eivät vähentäneet ruoan saantia, kun EE laski.Siten tutkimuksen lopussa hiirillä 30 °C:ssa oli suurempi ruumiinpaino, rasvamassa ja plasman glyseroli ja triglyseridit kuin hiirillä 22 °C:ssa.DIO-hiirten epätasapaino voi johtua lisääntyneestä nautintoon perustuvasta ruokavaliosta.
Hiiret eroavat kuitenkin ihmisistä useilla tärkeillä fysiologisilla tavoilla, ja vaikka allometristä skaalausta voidaan jossain määrin käyttää ihmisten muuttamiseksi, hiirten ja ihmisten väliset valtavat erot ovat lämmönsäätelyssä ja energian homeostaasissa.Tämä osoittaa perustavanlaatuisen epäjohdonmukaisuuden.Aikuisten hiirten keskimääräinen ruumiinmassa on vähintään tuhat kertaa pienempi kuin aikuisten (50 g vs. 50 kg), ja pinta-alan ja massan suhde eroaa noin 400 kertaa Meen kuvaaman epälineaarisen geometrisen muunnoksen vuoksi. .Yhtälö 2. Tämän seurauksena hiiret menettävät merkittävästi enemmän lämpöä suhteessa tilavuuteensa, joten ne ovat herkempiä lämpötilalle, alttiimpia hypotermialle ja niiden keskimääräinen perusaineenvaihdunta on kymmenen kertaa korkeampi kuin ihmisten.Huoneiden tavanomaisessa huoneenlämpötilassa (~ 22 ° C) hiirten on nostettava niiden kokonaisenergiamenojen (EE) noin 30% kehon lämpötilan ylläpitämiseksi.Alhaisemmissa lämpötiloissa EE kasvaa vielä enemmän noin 50% ja 100% 15 ja 7 ° C: ssa verrattuna EE: hen 22 ° C: ssa.Näin ollen tavanomaiset asumisolosuhteet aiheuttavat kylmästressivasteen, joka voi vaarantaa hiiren tulosten siirrettävyyden ihmisiin, sillä nykyaikaisissa yhteiskunnissa elävät ihmiset viettävät suurimman osan ajastaan lämpöneutraaleissa olosuhteissa (koska pinta-alasuhteemme pienempi pinta-ala suhteessa tilavuuteen tekee meistä vähemmän herkkiä lämpötila, kun luomme ympärillemme termoneutraalin vyöhykkeen (TNZ). EE perusaineenvaihduntanopeuden yläpuolella) ulottuu ~19-30°C6, kun taas hiirillä on korkeampi ja kapeampi kaista, joka ulottuu vain 2-4°C7,8 Itse asiassa tämä tärkeä näkökohta on saanut viime vuosina paljon huomiota4, 7,8,9,10,11,12 ja on ehdotettu, että joitain "lajieroja" voidaan lieventää nostamalla kuoren lämpötilaa 9. Lämpötila-alueesta ei kuitenkaan ole yksimielisyyttä. mikä muodostaa lämpöneutraaliuden hiirillä.Kulutus, substraatin käyttö, glukoositoleranssi sekä plasman lipidi- ja glukoosipitoisuudet sekä ruokahalun säätelevät hormonit.Lisäksi tarvitaan lisätutkimuksia sen selvittämiseksi, missä määrin ruokavalio voi vaikuttaa näihin parametreihin (DIO-hiiret, joilla on runsasrasvainen ruokavalio, voivat olla enemmän suuntautuneita mielihyvään (hedoniseen) ruokavalioon).Hiiriä pidettiin 22, 25, 27,5 tai 30 °C:ssa vähintään kolmen viikon ajan.Alle 22 ° C: n lämpötiloja ei ole tutkittu, koska eläinten vakiokotelo on harvoin huoneenlämpötilan alapuolella.Taustalla olevat syyt energiansaannin ja EE-tasapainon eroihin normaalipainoisten ja DIO-hiirten välillä vaativat lisätutkimuksia, mutta ne voivat liittyä DIO-hiirten patofysiologisiin muutoksiin ja liikalihavasta ruokavaliosta johtuvan nautintoon perustuvan ruokavalion vaikutukseen.
EE nousi lineaarisesti 30 °C:sta 22 °C:seen ja oli noin 30 % korkeampi 22 °C:ssa verrattuna 30 °C:seen (kuvio la, b).Hengityssuuntainen vaihtokurssi (RER) oli riippumaton lämpötilasta (kuva 1C, D).Ruoan saanti vastasi EE:n dynamiikkaa ja lisääntyi lämpötilan laskiessa (myös ~30 % korkeampi 22°C:ssa verrattuna 30°C:een (kuva 1e, f). Veden saanti. Tilavuus ja aktiivisuustaso eivät riippuneet lämpötilasta (kuva 1). 1g). -To).
Urospuoliset hiiret (C57BL/6J, 20 viikon ikäiset, yksittäiset kotelot, n = 7) pidettiin metabolisissa häkeissä 22 °C:ssa viikon ajan ennen tutkimuksen aloittamista.Kaksi päivää taustatietojen keräämisen jälkeen lämpötilaa nostettiin 2 °C:n välein kello 06:00 tuntia päivässä (valovaiheen alku).Tiedot esitetään keskiarvona ± keskiarvon standardivirhe ja tumma vaihe (18:00-06:00 h) on esitetty harmaalla laatikolla.a Energiankulutus (kcal/h), b Energian kokonaiskulutus eri lämpötiloissa (kcal/24 h), c Hengityksen vaihtokurssi (VCO2/VO2: 0,7–1,0), d Keskimääräinen RER valossa ja pimeässä (VCO2 /VO2) (nolla-arvoksi määritellään 0,7).e kumulatiivinen ravinnon saanti (g), f 24h kokonaisravinto, g 24h veden kokonaissaanti (ml), h 24h veden kokonaissaanti, i kumulatiivinen aktiivisuustaso (m) ja j kokonaisaktiivisuustaso (m/24h) .).Hiiriä pidettiin ilmoitetussa lämpötilassa 48 tuntia.24, 26, 28 ja 30 °C:n tiedot koskevat kunkin syklin viimeisiä 24 tuntia.Hiiret pysyivät ruokittuina koko tutkimuksen ajan.Tilastollinen merkitsevyys testattiin toistuvilla yksisuuntaisen ANOVA-mittauksilla, joita seurasi Tukeyn moninkertainen vertailutesti.Tähdet osoittavat merkittävyyttä alkuarvolle 22 °C, varjostus osoittaa merkitsevyyden muiden ryhmien välillä, kuten on ilmoitettu. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001. *P < 0,05,**P < 0,01,**P < 0,001,****P < 0,0001. *P < 0,05,**P < 0,01,**P < 0,001,****P < 0,0001. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001.Keskiarvot laskettiin koko koeajalle (0-192 tuntia).n = 7.
Kuten normaalipainoisten hiirten tapauksessa, EE lisääntyi lineaarisesti lämpötilan laskiessa, ja tässä tapauksessa EE oli myös noin 30 % korkeampi 22 °C:ssa verrattuna 30 °C:seen (kuvio 2a, b).RER ei muuttunut eri lämpötiloissa (kuvat 2c, d).Toisin kuin normaalipainoisilla hiirillä, ruoan saanti ei ollut yhdenmukainen EE:n kanssa huoneenlämpötilan funktiona.Ruoan saanti, veden saanti ja aktiivisuustaso olivat riippumattomia lämpötilasta (kuvat 2e–j).
Urospuolisia (C57BL/6J, 20 viikkoa) DIO-hiiriä pidettiin yksittäin metabolisissa häkeissä 22 °C:ssa viikon ajan ennen tutkimuksen aloittamista.Hiiret voivat käyttää 45 % HFD:tä ad libitum.Kahden päivän totuttelun jälkeen perustiedot kerättiin.Sen jälkeen lämpötilaa nostettiin 2 °C:n välein joka toinen päivä klo 06.00 (valovaiheen alku).Tiedot esitetään keskiarvona ± keskiarvon standardivirhe ja tumma vaihe (18:00-06:00 h) on esitetty harmaalla laatikolla.a Energiankulutus (kcal/h), b Energian kokonaiskulutus eri lämpötiloissa (kcal/24 h), c Hengityksen vaihtokurssi (VCO2/VO2: 0,7–1,0), d Keskimääräinen RER valossa ja pimeässä (VCO2 /VO2) (nolla-arvoksi määritellään 0,7).e kumulatiivinen ravinnon saanti (g), f 24h kokonaisravinto, g 24h veden kokonaissaanti (ml), h 24h veden kokonaissaanti, i kumulatiivinen aktiivisuustaso (m) ja j kokonaisaktiivisuustaso (m/24h) .).Hiiriä pidettiin ilmoitetussa lämpötilassa 48 tuntia.24, 26, 28 ja 30 °C:n tiedot koskevat kunkin syklin viimeisiä 24 tuntia.Hiiriä pidettiin 45 % HFD:ssä tutkimuksen loppuun asti.Tilastollinen merkitsevyys testattiin toistuvilla yksisuuntaisen ANOVA-mittauksilla, joita seurasi Tukeyn moninkertainen vertailutesti.Tähdet osoittavat merkittävyyttä alkuarvolle 22 °C, varjostus osoittaa merkitsevyyden muiden ryhmien välillä, kuten on ilmoitettu. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *Р<0,05, ***Р<0,001, ****Р<0,0001. *P<0,05, ***P<0,001, ****P<0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *Р<0,05, ***Р<0,001, ****Р<0,0001. *P<0,05, ***P<0,001, ****P<0,0001.Keskiarvot laskettiin koko koeajalle (0-192 tuntia).n = 7.
Toisessa koesarjassa tutkimme ympäristön lämpötilan vaikutusta samoihin parametreihin, mutta tällä kertaa hiiren ryhmien välillä, joita pidettiin jatkuvasti tietyssä lämpötilassa.Hiiret jaettiin neljään ryhmään tilastollisten muutosten minimoimiseksi ruumiinpainon, rasvan ja normaalin ruumiinpainon keskiarvossa ja keskihajonnassa (kuvat 3a-c).7 päivän totuttelun jälkeen rekisteröitiin 4,5 päivää EE:tä.Ympäristön lämpötila vaikuttaa merkittävästi EE:hen sekä päivänvalossa että yöllä (kuva 3d), ja se nousee lineaarisesti lämpötilan laskeessa 27,5 °C:sta 22 °C:seen (kuva 3e).Verrattuna muihin ryhmiin 25 °C:n ryhmän RER oli jonkin verran alentunut, eikä muiden ryhmien välillä ollut eroja (kuvat 3f, g).Ruoan nauttiminen EE-kuvion a kanssa kasvoi noin 30 % 22 °C:ssa verrattuna 30 °C:seen (kuvio 3h,i).Vedenkulutus ja aktiivisuus eivät eronneet merkittävästi ryhmien välillä (kuva 3j,k).Altistuminen erilaisille lämpötiloille jopa 33 päivän ajan ei johtanut eroihin ruumiinpainossa, vähärasvaisessa massassa ja rasvamassassa ryhmien välillä (kuvat 3n-s), mutta johti vähärasvaiseen ruumiinmassan vähenemiseen noin 15 % verrattuna itse ilmoittamat pisteet (kuva 3n-s).3b, r, c)) ja rasvamassa kasvoi yli 2 kertaa (~1 g:sta 2-3 g:aan, kuva 3c, t, c).Valitettavasti 30 °C:n kaapissa on kalibrointivirheitä, eikä se pysty tarjoamaan tarkkoja EE- ja RER-tietoja.
- Ruumiinpaino (a), vähärasvainen massa (b) ja rasvamassa (c) 8 päivän kuluttua (yksi päivä ennen siirtoa SABLE-järjestelmään).d Energiankulutus (kcal/h).e Keskimääräinen energiankulutus (0–108 tuntia) eri lämpötiloissa (kcal/24 tuntia).f Hengitysteiden vaihtosuhde (RER) (VCO2/VO2).g Keskimääräinen RER (VCO2/VO2).h Ruoan kokonaissaanti (g).i Keskimääräinen ruoan saanti (g/24 tuntia).j Veden kokonaiskulutus (ml).k Keskimääräinen vedenkulutus (ml/24 h).l Kumulatiivinen aktiivisuustaso (m).m Keskimääräinen aktiivisuustaso (m/24 h).n ruumiinpaino 18. päivänä, o painon muutos (-8. päivästä 18. päivään), p vähärasvainen massa 18. päivänä, q laihamassan muutos (-8. päivästä 18. päivään), r rasvamassa päivänä 18. ja rasvamassan muutos (-8 - 18 päivää).Toistettujen mittausten tilastollinen merkitsevyys testattiin Oneway-ANOVA:lla ja sen jälkeen Tukeyn moninkertaisella vertailutestillä. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001. *P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001, ****P<0,0001. *P <0,05 ， ** p <0,01 ， *** p <0,001 ， **** p <0,0001。 *P <0,05 ， ** p <0,01 ， *** p <0,001 ， **** p <0,0001。 *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001. *P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001, ****P<0,0001.Tiedot esitetään keskiarvona + keskiarvon standardivirhe, tumma vaihe (18:00-06:00 h) on esitetty harmailla laatikoilla.Histogrammien pisteet edustavat yksittäisiä hiiriä.Keskiarvot laskettiin koko koejaksolle (0-108 tuntia).n = 7.
Hiirten ruumiinpaino, vähärasvainen massa ja rasvamassa yhdistettiin lähtötilanteessa (kuvat 4a–c) ja pidettiin 22, 25, 27,5 ja 30 °C:ssa, kuten normaalipainoisilla hiirillä tehdyissä tutkimuksissa..Kun verrattiin hiiriryhmiä, EE:n ja lämpötilan välinen suhde osoitti samanlaista lineaarista suhdetta lämpötilaan ajan myötä samoissa hiirissä.Siten 22 °C:ssa pidetyt hiiret kuluttivat noin 30 % enemmän energiaa kuin 30 °C:ssa pidetyt hiiret (kuvio 4d, e).Eläimillä vaikutuksia tutkittaessa lämpötila ei aina vaikuttanut RER:iin (kuvat 4f,g).Lämpötila ei merkittävästi vaikuttanut ruoan, veden saantiin ja aktiivisuuteen (kuvat 4h-m).33 päivän kasvatuksen jälkeen hiirillä 30 ° C: ssa oli huomattavasti korkeampi kuin hiirillä 22 ° C: ssa (kuvio 4N).Verrattuna vastaaviin peruspisteisiinsä 30 °C:ssa kasvatetuilla hiirillä oli merkittävästi suurempi ruumiinpaino kuin 22 °C:ssa kasvatetuilla hiirillä (keskiarvo ± keskiarvon standardivirhe: kuvio 4o).Suhteellisen korkeampi painonnousu johtui rasvamassan kasvusta (kuvio 4p, q) eikä vähärasvaisen massan lisääntymisestä (kuvio 4r, s).Yhdenmukaisesti alhaisemman EE-arvon kanssa 30 °C:ssa, useiden BAT-geenien, jotka lisäävät BAT-toimintaa/aktiivisuutta, ilmentyminen väheni 30 °C:ssa verrattuna 22 °C:seen: Adra1a, Adrb3 ja Prdm16.Muut avaingeenit, jotka myös lisäävät BAT:n toimintaa/aktiivisuutta, eivät vaikuttaneet: Sema3a (neuriittien kasvun säätely), Tfam (mitokondrioiden biogeneesi), Adrb1, Adra2a, Pck1 (glukoneogeneesi) ja Cpt1a.Yllättäen Ucp1 ja Vegf-a, jotka liittyvät lisääntyneeseen termogeeniseen aktiivisuuteen, eivät vähentyneet 30 °C:n ryhmässä.Itse asiassa Ucp1-tasot kolmessa hiiressä olivat korkeammat kuin 22 °C:n ryhmässä, ja Vegf-a ja Adrb2 olivat merkittävästi kohonneita.Verrattuna 22 °C:n ryhmään, 25 °C:ssa ja 27,5 °C:ssa pidetyt hiiret eivät osoittaneet muutosta (lisäkuva 1).
- Ruumiinpaino (a), vähärasvainen massa (b) ja rasvamassa (c) 9 päivän kuluttua (yksi päivä ennen siirtoa SABLE-järjestelmään).d Energiankulutus (EE, kcal/h).e Keskimääräinen energiankulutus (0–96 tuntia) eri lämpötiloissa (kcal/24 tuntia).f Hengitysteiden vaihtosuhde (RER, VCO2/VO2).g Keskimääräinen RER (VCO2/VO2).h Ruoan kokonaissaanti (g).i Keskimääräinen ruoan saanti (g/24 tuntia).j Veden kokonaiskulutus (ml).k Keskimääräinen vedenkulutus (ml/24 h).l Kumulatiivinen aktiivisuustaso (m).m Keskimääräinen aktiivisuustaso (m/24 h).n ruumiinpaino päivänä 23 (g), o painonmuutos, p vähärasvaisen massan, q rasvattoman massan muutos (g) päivänä 23 verrattuna päivään 9, rasvamassan muutos (g) 23 päivänä, rasva massa (g) verrattuna päivään 8, päivään 23 verrattuna -8. päivään.Toistettujen mittausten tilastollinen merkitsevyys testattiin Oneway-ANOVA:lla ja sen jälkeen Tukeyn moninkertaisella vertailutestillä. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *Р<0,05, ***Р<0,001, ****Р<0,0001. *P<0,05, ***P<0,001, ****P<0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *P < 0,05, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. *Р<0,05, ***Р<0,001, ****Р<0,0001. *P<0,05, ***P<0,001, ****P<0,0001.Tiedot esitetään keskiarvona + keskiarvon standardivirhe, tumma vaihe (18:00-06:00 h) on esitetty harmailla laatikoilla.Histogrammien pisteet edustavat yksittäisiä hiiriä.Keskiarvot laskettiin koko koejaksolle (0-96 tuntia).n = 7.
Ihmisten tavoin hiiret luovat usein mikroympäristöjä vähentääkseen lämpöhäviötä ympäristöön.Tämän ympäristön tärkeyden määrittämiseksi EE:lle arvioimme EE:n lämpötiloissa 22, 25, 27,5 ja 30 °C, nahkasuojien ja pesämateriaalin kanssa tai ilman.22 °C:ssa standardikalvojen lisääminen vähentää EE:tä noin 4 %.Myöhempi pesämateriaalin lisäys alensi EE:tä 3–4 % (kuvat 5a,b).Merkittäviä muutoksia RER:ssä, ruuan saannissa, vedenkulutuksessa tai aktiivisuustasoissa ei havaittu lisäämällä taloja tai nahkoja + vuodevaatteita (kuva 5i–p).Ihon ja pesimämateriaalin lisääminen vähensi myös merkittävästi EE:tä 25 ja 30 °C:ssa, mutta vasteet olivat kvantitatiivisesti pienempiä.27,5 °C:ssa ei havaittu eroa.Erityisesti näissä kokeissa EE laski lämpötilan noustessa, tässä tapauksessa noin 57 % alhaisempi kuin EE 30 °C:ssa verrattuna 22 °C:seen (kuvio 5c-h).Sama analyysi tehtiin vain valofaasille, jossa EE oli lähempänä perusaineenvaihduntanopeutta, koska tässä tapauksessa hiiret lepäävät enimmäkseen ihossa, mikä johti vertailukelpoisiin vaikutuskokoihin eri lämpötiloissa (lisäkuvat 2a–h) .
Tiedot hiiristä suoja- ja pesämateriaalista (tummansininen), kodin mutta ei pesämateriaalista (vaaleansininen) sekä koti- ja pesämateriaalista (oranssi).Energiankulutus (EE, KCAL/H) huoneille A, C, E ja G 22, 25, 27,5 ja 30 ° C, B, D, F ja H tarkoittaa EE (KCAL/H).ip Tiedot 22°C:ssa pidetyistä hiiristä: i hengitystiheys (RER, VCO2/VO2), j keskimääräinen RER (VCO2/VO2), k kumulatiivinen ravinnon saanti (g), l keskimääräinen ravinnon saanti (g/24 h) , m veden kokonaiskulutus (mL), n keskimääräinen vedenotto AUC (mL/24h), o kokonaisaktiivisuus (m), p keskimääräinen aktiivisuustaso (m/24h).Tiedot esitetään keskiarvona + keskiarvon standardivirhe, tumma vaihe (18:00-06:00 h) on esitetty harmailla laatikoilla.Histogrammien pisteet edustavat yksittäisiä hiiriä.Toistettujen mittausten tilastollinen merkitsevyys testattiin Oneway-ANOVA:lla ja sen jälkeen Tukeyn moninkertaisella vertailutestillä. *P < 0,05, **P < 0,01. *P < 0,05, **P < 0,01. *Р<0,05, **Р<0,01. *P<0,05, **P<0,01. *P < 0,05,**P < 0,01. *P < 0,05,**P < 0,01. *Р<0,05, **Р<0,01. *P<0,05, **P<0,01.Keskiarvot laskettiin koko koejaksolle (0-72 tuntia).n = 7.
Normaalipainoisilla hiirillä (2-3 tunnin paasto) kasvatus eri lämpötiloissa ei johtanut merkittäviin eroihin plasman TG-, 3-HB-, kolesteroli-, ALT- ja AST-pitoisuuksissa, vaan HDL lämpötilan funktiona.Kuva 6a-e).Leptiinin, insuliinin, C-peptidin ja glukagonin paastoplasmapitoisuudet eivät myöskään eronneet ryhmien välillä (kuvat 6g–j).Glukoositoleranssitestin päivänä (31 päivän jälkeen eri lämpötiloissa) verensokerin perustaso (5-6 tunnin paasto) oli noin 6,5 mM, eikä ryhmien välillä ollut eroa. Suun kautta otetun glukoosin anto nosti verensokeripitoisuuksia merkittävästi kaikissa ryhmissä, mutta sekä huippupitoisuus että inkrementaalinen käyrien alla oleva pinta-ala (iAUC:t) (15–120 min) olivat pienempiä 30 °C:ssa pidettyjen hiirten ryhmässä (yksittäiset aikapisteet: P < 0,05–P < 0,0001, kuva 6k, l) verrattuna hiiriin, joita pidettiin 22, 25 ja 27,5 °C:ssa (jotka eivät eronneet toisistaan). Suun kautta otetun glukoosin anto nosti verensokeripitoisuuksia merkittävästi kaikissa ryhmissä, mutta sekä huippupitoisuus että inkrementaalinen käyrien alla oleva pinta-ala (iAUC:t) (15–120 min) olivat pienempiä 30 °C:ssa pidettyjen hiirten ryhmässä (yksittäiset aikapisteet: P < 0,05–P < 0,0001, kuva 6k, l) verrattuna hiiriin, joita pidettiin 22, 25 ja 27,5 °C:ssa (jotka eivät eronneet keskenään). Пероральное введение глюкозы значительно повышало концентрацию глюкозы в крови во всех группах, но как пиковая концентрация, так и площадь приращения под кривыми (iAUC) (15–120 мин) были ниже в группе мышей, содержащихся при 30 °C (отдельные временные точки: P < 0,05–P < 0,0001, 6k, l) по сравнению с мышами, содержащимися при 22, 25 ja 27,5 °C (которые не не). Glukoosin oraalinen anto lisäsi merkittävästi veren glukoosipitoisuuksia kaikissa ryhmissä, mutta sekä huippupitoisuus että inkrementaalinen käyrien alla oleva pinta-ala (iAUC) (15–120 min) olivat alhaisemmat 30 °C:n hiiriryhmässä (erilliset aikapisteet: P < 0,05– P < 0,0001, kuvio 6k, l) verrattuna hiiriin, joita pidettiin 22, 25 ja 27,5 °C:ssa (jotka eivät eronneet toisistaan).口服 葡萄糖 的 给 药 显着 增加 了 所有组 的 血糖 浓度 ， 但 在 30 ° C 饲养 的 小鼠组 中 ， 浓度 和 曲线 下 增加 面积 (iauc) (15-120 分钟) 均 较 低 （各 个 时间 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点：P < 0,05–P < 0,0001，图6k，l）与饲养在22、25 和27,5°C 的小鼠（彼此之间没有口服 葡萄糖 的 给 药 显着 了 所有组 的 血糖 浓度 但 在 在 在 30 ° C 饲养 小 鼠组 中 ， 和 曲线 下 增加 面积 面积 (iauc) (15-120 分钟) 均 较 低 各 个 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点 点点 点：P < 0,05–P < 0,0001，图6k，l）与饲养在22、25和27,5°C 的小鼠（彼此之闄Glukoosin oraalinen antaminen lisäsi merkittävästi veren glukoosipitoisuuksia kaikissa ryhmissä, mutta sekä huippupitoisuus että käyrän alla oleva pinta-ala (iAUC) (15–120 min) olivat alhaisemmat 30 °C:ssa ruokittujen hiirten ryhmässä (kaikki ajankohdat).: P < 0,05 – P < 0,0001, рис. : P < 0,05 – P < 0,0001, kuva.6l, l) verrattuna hiiriin, joita pidettiin 22, 25 ja 27,5 °C:ssa (ei eroa keskenään).
Plasman TG:n, 3-HB:n, kolesterolin, HDL:n, ALT:n, AST:n, FFA:n, glyserolin, leptiinin, insuliinin, C-peptidin ja glukagonin pitoisuudet näytetään aikuisilla DIO(al)-uroshiirillä 33 päivän ruokinnan jälkeen ilmoitetussa lämpötilassa. .Hiiriä ei ruokittu 2-3 tuntia ennen verinäytteen ottamista.Poikkeuksena oli suun kautta otettava glukoositoleranssitesti, joka suoritettiin kaksi päivää ennen tutkimuksen päättymistä hiirillä, jotka paastosivat 5-6 tuntia ja pidettiin sopivassa lämpötilassa 31 päivää.Hiirille altistettiin 2 g/kg ruumiinpainoa.Käyrän alla oleva pinta-ala (L) ilmaistaan lisätietoina (iAUC).Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM.Pisteet edustavat yksittäisiä näytteitä. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001, n = 7. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001, n = 7. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001, n = 7. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001, n=7. *P < 0,05，**P < 0,01，**P < 0,001，****P < 0,0001，n = 7. *P < 0,05，**P < 0,01，**P < 0,001，****P < 0,0001，n = 7. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001, n = 7. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001, n=7.
DIO-hiirillä (myös paastolla 2-3 tuntia) plasman kolesteroli-, HDL-, ALT-, AST- ja FFA-pitoisuudet eivät eronneet ryhmien välillä.Sekä TG että glyseroli olivat merkittävästi kohonneet 30 °C:n ryhmässä verrattuna 22 °C:n ryhmään (kuvat 7a–h).Sitä vastoin 3 GB oli noin 25 % pienempi 30 °C:ssa verrattuna 22 °C:seen (kuvio 7b).Vaikka 22 °C:ssa pidettyjen hiirten energiatasapaino oli yleisesti ottaen positiivinen, kuten painonnousu viittaa, erot plasman TG-, glyseroli- ja 3-HB-pitoisuuksissa viittaavat siihen, että hiirillä 22 °C:ssa näytteenoton aikana oli vähemmän kuin 22 °C:ssa. C.°C.Hiiret, joita kasvatettiin 30 °C:ssa, olivat suhteellisesti energeettisesti negatiivisemmassa tilassa.Tämän mukaisesti uutettavan glyserolin ja TG: n maksapitoisuudet, mutta eivät glykogeenit ja kolesterolit, olivat korkeammat 30 ° C-ryhmässä (lisäkuva 3A-D).Tutkiaksemme, ovatko lämpötilasta riippuvat erot lipolyysissä (mitattu plasman TG:llä ja glyserolilla) seurausta lisäkives- tai nivusrasvan sisäisistä muutoksista, otimme rasvakudosta näistä varastoista tutkimuksen lopussa ja määritimme vapaat rasvahapot mm. vivo.ja glyserolin vapautuminen.Kaikissa kokeellisissa ryhmissä rasvakudosnäytteet epididymaalisista ja nivelkappaleista osoittivat ainakin kaksinkertaisen glyserolin ja FFA-tuotannon lisääntymisen vasteena isoproterenolistimulaatiolle (lisäkuvio 4A-D).Kuitenkaan ei havaittu kuoren lämpötilan vaikutusta perus- tai isoproterenolistimuloituun lipolyysiin.Yhdenmukaisesti korkeamman kehon painon ja rasvamassan kanssa plasman leptiinitasot olivat merkitsevästi korkeammat 30 ° C: n ryhmässä kuin 22 ° C: n ryhmässä (kuvio 7i).Päinvastoin, insuliinin ja C-peptidin plasmatasot eivät eronneet lämpötilaryhmien välillä (kuvat 7k, k), mutta plasman glukagoni osoitti riippuvuutta lämpötilasta, mutta tässä tapauksessa melkein 22 °C vastakkaisessa ryhmässä verrattiin kahdesti. 30°C:een.FROM.Ryhmä C (kuvio 7l).FGF21 ei eronnut eri lämpötilaryhmien välillä (kuva 7M).OGTT-päivänä veren glukoosin perustaso oli noin 10 mM, eikä se eronnut eri lämpötiloissa pidettyjen hiirten välillä (kuvio 7n).Glukoosin oraalinen anto nosti veren glukoositasoja ja saavutti huippunsa kaikissa ryhmissä noin 18 mM:n pitoisuudessa 15 minuuttia annostelun jälkeen.iAUC:ssa (15–120 min) ja pitoisuuksissa ei ollut merkittäviä eroja eri ajankohtina annoksen ottamisen jälkeen (15, 30, 60, 90 ja 120 min) (kuva 7n, o).
Plasman TG:n, 3-HB:n, kolesterolin, HDL:n, ALT:n, AST:n, FFA:n, glyserolin, leptiinin, insuliinin, C-peptidin, glukagonin ja FGF21:n pitoisuudet osoitettiin aikuisilla DIO (ao)-uroshiirillä 33 päivän ruokinnan jälkeen.määritetty lämpötila.Hiiriä ei ruokittu 2-3 tuntia ennen verinäytteen ottamista.Suun kautta suoritettu glukoositoleranssitesti oli poikkeus, koska se suoritettiin annoksella 2 g/kg ruumiinpainoa kaksi päivää ennen tutkimuksen päättymistä hiirillä, joita pidettiin paastossa 5-6 tuntia ja pidettiin sopivassa lämpötilassa 31 päivää.Käyrän alla oleva pinta-ala (o) näytetään lisätietoina (iAUC).Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM.Pisteet edustavat yksittäisiä näytteitä. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001, n = 7. *P < 0,05, **P < 0,01, **P < 0,001, ****P < 0,0001, n = 7. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001, n = 7. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001, n=7. *P < 0,05，**P < 0,01，**P < 0,001，****P < 0,0001，n = 7. *P < 0,05，**P < 0,01，**P < 0,001，****P < 0,0001，n = 7. *P <0,05, **P <0,01, **P <0,001, ****P <0,0001, n = 7. *P<0,05, **P<0,01, **P<0,001, ****P<0,0001, n=7.
Jyrsijätiedon siirrettävyys ihmisille on monimutkainen kysymys, jolla on keskeinen rooli tulkittaessa havaintojen merkitystä fysiologisen ja farmakologisen tutkimuksen kontekstissa.Taloudellisista syistä ja tutkimuksen helpottamiseksi hiiriä pidetään usein huoneenlämmössä niiden termoneutraalin vyöhykkeen alapuolella, mikä johtaa useiden kompensoivien fysiologisten järjestelmien aktivoitumiseen, mikä lisää aineenvaihduntaa ja mahdollisesti heikentää translatoituvuutta9.Siten hiirten altistuminen kylmälle voi tehdä hiiristä resistenttejä ruokavalion aiheuttamalle liikalihavuudelle ja voi estää hyperglykemian streptotsotosiinilla hoidetuissa rotissa lisääntyneen insuliinista riippumattoman glukoosin kuljetuksen vuoksi.Ei kuitenkaan ole selvää, missä määrin pitkäaikainen altistuminen erilaisille merkityksellisille lämpötiloille (huoneesta lämpöneutraaliin) vaikuttaa normaalipainoisten (ruoalla) ja DIO-hiirten (HFD:llä) erilaiseen energiahomeostaasiin ja aineenvaihduntaparametreihin sekä johon he pystyivät tasapainottamaan EE: n nousun ruoan saannin lisääntymisen kanssa.Tässä artikkelissa esitellyn tutkimuksen tarkoituksena on tuoda hieman selvyyttä tähän aiheeseen.
Osoitamme, että normaalipainoisilla aikuisilla hiirillä ja urospuolisilla DIO-hiirillä EE on kääntäen verrannollinen huoneenlämpötilaan välillä 22-30 °C.Siten EE 22 °C:ssa oli noin 30 % korkeampi kuin 30 °C:ssa.molemmissa hiirimalleissa.Tärkeä ero normaalipainoisten hiirten ja DIO-hiirien välillä on kuitenkin se, että vaikka normaalipainoiset hiiret sopivat EE:hen alhaisemmissa lämpötiloissa säätämällä ruoan saantia vastaavasti, DIO-hiirten ravinnon saanti vaihteli eri tasoilla.Tutkimuslämpötilat olivat samanlaiset.Yhden kuukauden kuluttua 30 ° C: ssa pidettyjä Dio -hiiriä saivat enemmän ruumiinpainoa ja rasvamassaa kuin hiiret, joita pidettiin 22 ° C: ssa, kun taas normaalit ihmiset pidettiin samassa lämpötilassa ja saman ajanjakson ajan ei johtanut kuumeeseen.riippuvainen ero ruumiinpainossa.painoiset hiiret.Verrattuna lämpötiloihin, jotka ovat lähellä termoneutraalia tai huoneenlämpötilassa, kasvun huoneenlämpötilassa johti DIO: n tai normaalipainon hiiriin runsaassa rasvaisessa ruokavaliossa, mutta ei normaalin painon hiiriruokavaliossa suhteellisen vähemmän painoa.kehon.Tukevat muut tutkimukset17,18,19,20,21 mutta eivät kaikki22,23.
Kyky luoda mikroympäristö lämpöhäviön vähentämiseksi oletetaan siirtävän lämpöneutraaliutta vasemmalle8, 12. Tutkimuksessamme sekä pesimämateriaalin lisääminen että piilottaminen vähensivät EE:tä, mutta eivät johtaneet lämpöneutraaliuteen 28 °C:seen asti.Näin ollen tietomme eivät tue sitä, että yhden polven aikuisten hiirten lämpöneutraaliuden alimman pisteen tulisi olla 26-28 °C, kuten on esitetty 8, 12, mutta se tukee muita lämpöneutraalisuutta osoittavia tutkimuksia.30°C:n lämpötilat matalan pisteen hiirillä7, 10, 24. Asiaa mutkistaa, että hiirten lämpöneutraalin pisteen ei ole osoitettu olevan staattinen päivän aikana, koska se on alhaisempi lepovaiheen (kevyt) aikana, mahdollisesti alhaisemmasta kalorimäärästä johtuen aktiivisuuden ja ruokavalion aiheuttaman termogeneesin seurauksena.Näin ollen valofaasissa termisen neutraaliuden alin piste on ~29°С ja pimeässä ~33°С25.
Viime kädessä ympäristön lämpötilan ja kokonaisenergiankulutuksen välinen suhde määräytyy lämmön haihtumisen perusteella.Tässä yhteydessä pinta-alan suhde tilavuuteen on tärkeä termisen herkkyyden määräävä tekijä, joka vaikuttaa sekä lämmön hajaantumiseen (pinta-ala) että lämmöntuotantoon (tilavuus).Lämmönsiirron määrää pinta-alan lisäksi myös eristys (lämmönsiirtonopeus).Ihmisillä rasvamassa voi vähentää lämpöhäviötä luomalla eristävän esteen kehon kuoren ympärille, ja on ehdotettu, että rasvamassa on tärkeä myös hiirten lämmöneristyksen kannalta, mikä alentaa lämpöneutraalia pistettä ja vähentää lämpötilaherkkyyttä termisen neutraalin pisteen alapuolelle ( käyrän kaltevuus).ympäristön lämpötila verrattuna EE:hen)12.tekijä, ei ainakaan tutkitulla lämpötila-alueella.Tämä on yhdenmukainen muiden tutkimusten kanssa, jotka on paremmin suunniteltu tutkimaan tätä 4,24: tä.Näissä tutkimuksissa liikalihavuuden eristävä vaikutus oli pieni, mutta turkisten todettiin muodostavan 30-50 % kokonaislämmöneristyksestä4,24.Hiirten ja ihmisten välisten turkkien lajierojen lisäksi hiirten liikalihavuuden huonoon eristävään vaikutukseen voivat vaikuttaa myös seuraavat seikat: Ihmisen rasvamassan eristystekijää välittää pääasiassa ihonalainen rasvamassa (paksuus)26,27.Tyypillisesti jyrsijöillä Alle 20 % eläinrasvojen kokonaismäärästä28.Lisäksi rasvan kokonaismassa ei välttämättä ole edes optimaalinen yksilön lämmöneristyksen mitta, koska on väitetty, että parantuneen lämmöneristyksen kompensoi väistämätön pinta-alan kasvu (ja siten lisääntynyt lämpöhäviö) rasvamassan kasvaessa..
Normaalipainoisilla hiirillä TG:n, 3-HB:n, kolesterolin, HDL:n, ALT:n ja AST:n paastoplasman pitoisuudet eivät muuttuneet eri lämpötiloissa lähes 5 viikkoon, luultavasti siksi, että hiiret olivat samassa energiatasapainotilassa.olivat samat painon ja kehon koostumuksessa kuin tutkimuksen lopussa.Rasvamassan samankaltaisuuden mukaisesti ei myöskään ollut eroja plasman leptiinitasoissa eikä paastoinsuliinissa, C-peptidissä ja glukagonissa.Lisää signaaleja löydettiin DIO-hiiristä.Vaikka 22 °C:n hiirillä ei myöskään ollut negatiivista kokonaisenergiatasapainoa tässä tilassa (kun ne lihoivat), tutkimuksen lopussa ne olivat suhteellisen energiavajeempia verrattuna hiiriin, joita kasvatettiin 30 °C:ssa sellaisissa olosuhteissa kuin korkeat ketonit.Kehon tuotanto (3 Gt) ja glyserolin ja TG: n pitoisuuden väheneminen plasmassa.Lämpötilasta riippuvat erot lipolyysissä eivät kuitenkaan näytä olevan seurausta lisäkives- tai nivusrasvan sisäisistä muutoksista, kuten muutoksista adipohormoneihin reagoivan lipaasin ilmentymisessä, koska näistä varastoista uutetusta rasvasta vapautuva FFA ja glyseroli ovat lämpötilan välillä. ryhmät ovat samanlaisia keskenään.Vaikka emme tutkineet sympaattista sävyä tässä tutkimuksessa, muut ovat havainneet, että se (sykeen ja keskimääräiseen valtimopaineeseen perustuen) liittyy lineaarisesti hiirten ympäristön lämpötilaan ja on suunnilleen alhaisempi 30 °C:ssa kuin 22 °C:ssa 20 %. C Siten lämpötilasta riippuvat erot sympaattisessa sävyssä voivat vaikuttaa lipolyysiin tutkimuksessamme, mutta koska sympaattisen sävyn lisääntyminen pikemminkin stimuloi kuin estää lipolyysiä, muut mekanismit voivat torjua tätä vähenemistä viljellyissä hiirissä.Mahdollinen rooli kehon rasvan hajoamisessa.Huonelämpötila.Lisäksi osa sympaattisen sävyn stimuloivasta vaikutuksesta lipolyysiin välittyy epäsuorasti voimakkaalla insuliinin erittymisen estymisellä, mikä korostaa insuliinin keskeyttämisen vaikutusta lipolyysiin30, mutta tutkimuksessamme plasman paastoinsuliinin ja C-peptidin sympaattisen sävyn eri lämpötiloissa havaittiin. ei riitä muuttamaan lipolyysiä.Sen sijaan havaitsimme, että energiatilan erot olivat todennäköisimmin tärkein tekijä näissä DIO -hiirien erissä.Taustalla olevat syyt, jotka johtavat parempaan elintarvikkeiden saannin säätelyyn EE: n kanssa normaalipainoisissa hiirissä, vaativat lisätutkimuksia.Yleensä ruoan saantia hallitsee kuitenkin homeostaattiset ja hedoniset vihjeet31,32,33.Vaikka keskustelua käydäänkin siitä, kumpi näistä kahdesta signaalista on kvantitatiivisesti tärkeämpi,31,32,33 tiedetään hyvin, että pitkäaikainen runsasrasvaisten ruokien kulutus johtaa enemmän nautintoon perustuvaan syömiskäyttäytymiseen, joka ei jossain määrin liity homeostaasi..– säännelty ravinnonsaanti34,35,36.Siksi 45-prosenttisella HFD:llä käsiteltyjen DIO-hiirten lisääntynyt hedoninen ruokintakäyttäytyminen voi olla yksi syy siihen, miksi nämä hiiret eivät tasapainottaneet ravinnon saantia EE:n kanssa.Mielenkiintoista on, että eroja ruokahalussa ja verensokeria säätelevissä hormoneissa havaittiin myös lämpötilasäädellyissä DIO-hiirissä, mutta ei normaalipainoisissa hiirissä.DIO-hiirillä plasman leptiinitasot nousivat lämpötilan noustessa ja glukagonitasot laskivat lämpötilan noustessa.Se, missä määrin lämpötila voi suoraan vaikuttaa näihin eroihin, ansaitsee lisätutkimusta, mutta leptiinin tapauksessa suhteellinen negatiivinen energiatasapaino ja siten alhaisempi rasvamassa hiirillä 22 °C:ssa oli varmasti tärkeä rooli, koska rasvamassa ja plasman leptiini korreloi voimakkaasti 37.Glukagonisignaalin tulkinta on kuitenkin hämmentävämpi.Kuten insuliinin kohdalla, sympaattisen sävyn kohoaminen esti voimakkaasti glukagonin eritystä, mutta korkeimman sympaattisen sävyn ennustettiin olevan 22 °C:n ryhmässä, jolla oli korkeimmat plasman glukagonipitoisuudet.Insuliini on toinen vahva plasman glukagonin säätelijä, ja insuliiniresistenssi ja tyypin 2 diabetes liittyvät vahvasti paasto- ja aterianjälkeiseen hyperglukagonemiaan38,39.Tutkimuksemme DIO-hiiret olivat kuitenkin myös insuliiniherkkiä, joten tämä ei myöskään voinut olla päätekijä glukagonin signaalin lisääntymisessä 22 °C:n ryhmässä.Maksan rasvapitoisuus liittyy myös positiivisesti plasman glukagonipitoisuuden nousuun, jonka mekanismeihin voi vuorostaan kuulua maksan glukagoniresistenssi, vähentynyt urean tuotanto, lisääntyneet verenkierrossa olevat aminohappopitoisuudet ja lisääntynyt aminohappostimuloima glukagonin eritys40,41, 42.Kuitenkin, koska uutettavat glyserolin ja TG:n pitoisuudet eivät eronneet tutkimuksessamme lämpötilaryhmien välillä, tämä ei myöskään voinut olla mahdollinen tekijä plasman pitoisuuksien nousussa 22 °C:n ryhmässä.Triiodotyroniinilla (T3) on kriittinen rooli aineenvaihdunnan kokonaismäärässä ja metabolisen puolustuksen aloittamisessa hypotermia43,44 vastaan.Siten plasman T3-pitoisuus, jota mahdollisesti ohjataan keskusvälitteisillä mekanismeilla,45,46 kasvaa sekä hiirillä että ihmisillä lämpöneutraaleissa olosuhteissa47, vaikka ihmisillä lisääntyminen on pienempi, mikä on alttiimpaa hiirille.Tämä on sopusoinnussa ympäristön lämpöhäviön kanssa.Emme mittaaneet plasman T3-pitoisuuksia tässä tutkimuksessa, mutta pitoisuudet ovat saattaneet olla alhaisemmat 30 °C:n ryhmässä, mikä saattaa selittää tämän ryhmän vaikutuksen plasman glukagonitasoihin, koska me (päivitetty kuva 5a) ja muut ovat osoittaneet, että T3 lisää plasman glukagonia annoksesta riippuvalla tavalla.Kilpirauhashormonien on raportoitu indusoivan FGF21:n ilmentymistä maksassa.Kuten glukagonin, myös plasman FGF21-pitoisuudet nousivat plasman T3-pitoisuuksien myötä (täydentävä kuva 5b ja viite 48), mutta glukagoniin verrattuna lämpötila ei vaikuttanut tutkimuksessamme FGF21-plasmakonsentraatioihin.Tämän eron taustalla olevat syyt vaativat lisätutkimuksia, mutta T3-ohjatun FGF21-induktion pitäisi tapahtua korkeammilla T3-altistustasoilla verrattuna havaittuun T3-ohjautuvaan glukagonivasteeseen (täydentävä kuva 5b).
HFD:n on osoitettu liittyvän voimakkaasti heikentyneeseen glukoositoleranssiin ja insuliiniresistenssiin (markkerit) hiirillä, joita kasvatettiin 22 °C:ssa.HFD: hen ei kuitenkaan liitetty heikentynyttä glukoositoleranssia tai insuliiniresistenssiä, kun sitä kasvatettiin termoneutraalissa ympäristössä (määritelty tässä 28 ° C) 19.Tutkimuksessamme tätä suhdetta ei toistettu DIO -hiirissä, mutta normaalipainoiset hiiret, joita pidettiin 30 ° C: ssa, paransi merkittävästi glukoositoleranssia.Syy tähän eroon vaatii lisätutkimuksia, mutta siihen voi vaikuttaa se tosiasia, että tutkimuksessamme olleet DIO-hiiret olivat insuliiniresistenttejä, ja plasman C-peptidipitoisuudet paastossa ja insuliinipitoisuudet olivat 12-20 kertaa korkeammat kuin normaalipainoisilla hiirillä.ja veressä tyhjään vatsaan.Glukoosipitoisuudet ovat noin 10 mM (noin 6 mm normaalissa ruumiinpainossa), mikä näyttää jättävän pienen ikkunan mahdollisille hyödyllisille vaikutuksille altistumiselle termoneutraalille olosuhteille glukoositoleranssin parantamiseksi.Mahdollinen hämmentävä tekijä on se, että käytännön syistä OGTT suoritetaan huoneenlämmössä.Siten korkeammissa lämpötiloissa pidetyt hiiret kokivat lievän kylmäshokin, mikä saattaa vaikuttaa glukoosin imeytymiseen/puhdistumaan.Samanlaisten paastoveren glukoosipitoisuuksien perusteella eri lämpötilaryhmissä ympäristön lämpötilan muutokset eivät kuitenkaan välttämättä vaikuttaneet merkittävästi tuloksiin.
Kuten aiemmin mainittiin, äskettäin on korostettu, että huonelämpötilan nostaminen voi heikentää joitain kylmästressin aiheuttamia reaktioita, mikä saattaa kyseenalaistaa hiiren tietojen siirrettävyyden ihmisiin.Ei kuitenkaan ole selvää, mikä on optimaalinen lämpötila hiirten pitämiselle ihmisen fysiologian jäljittelemiseksi.Vastaukseen tähän kysymykseen voivat vaikuttaa myös tutkimuskenttä ja tutkitaan päätepiste.Esimerkki tästä on ruokavalion vaikutus maksasasvojen kertymiseen, glukoositoleranssiin ja insuliiniresistenssiin19.Energiankulutuksen osalta jotkut tutkijat uskovat, että lämpöneutraalius on optimaalinen lämpötila kasvatukselle, koska ihmiset tarvitsevat vain vähän ylimääräistä energiaa ylläpitääkseen ruumiinlämpönsä, ja he määrittelevät aikuisten hiirten yhden kierroksen lämpötilaksi 30 °C7,10.Toiset tutkijat uskovat, että lämpötila, joka on verrattavissa siihen, mitä ihmiset tyypillisesti kokevat aikuisten hiirten ollessa toisella polvella, on 23-25 °C, koska he havaitsivat lämpöneutraaliuden olevan 26-28 °C ja perustuen ihmisten alle noin 3 °C.Tutkimuksemme on yhdenmukainen useiden muiden tutkimusten kanssa, joissa todetaan, että lämpöneutraaliutta ei saavuteta lämpötiloissa 26-28 °C4, 7, 10, 11, 24, 25, mikä osoittaa, että 23-25 °C on liian alhainen.Toinen tärkeä huomioitava tekijä huonelämpötilan ja lämpöneutraaliuden suhteen hiirillä on yksittäinen tai ryhmäsuoja.Kun hiiriä pidettiin ryhmissä eikä yksittäin, kuten tutkimuksessamme, lämpötilaherkkyys väheni, mahdollisesti eläinten ahtautumisesta johtuen.Huoneen lämpötila oli kuitenkin edelleen LTL: n 25: n alapuolella, kun käytettiin kolme ryhmää.Ehkä tärkein lajien välinen ero tässä suhteessa on BAT-toiminnan määrällinen merkitys suojana hypotermiaa vastaan.Siten vaikka hiiret suurelta osin kompensoivat suuremman kalorihävityksensä lisäämällä BAT-aktiivisuutta, joka on yli 60 % EE pelkästään 5 °C:ssa,51,52 ihmisen BAT-aktiivisuuden osuus EE:stä oli merkittävästi suurempi, paljon pienempi.Siksi BAT-aktiivisuuden vähentäminen voi olla tärkeä tapa lisätä ihmisen translaatiota.BAT-aktiivisuuden säätely on monimutkaista, mutta sitä välittävät usein adrenergisen stimulaation, kilpirauhashormonien ja UCP114,54,55,56,57-ilmentymisen yhteisvaikutukset.Ryhmien välillä 30 ja 22 °C:ssa havaitut erot eivät kuitenkaan aina osoittaneet BAT-aktiivisuuden lisääntymistä 22 °C:n ryhmässä, koska Ucp1, Adrb2 ja Vegf-a olivat alentuneita 22 °C:n ryhmässä.Näiden odottamattomien tulosten perimmäinen syy on vielä määritettävä.Yksi mahdollisuus on, että niiden lisääntynyt ilmentyminen ei välttämättä heijasta signaalia kohonneesta huonelämpötilasta, vaan pikemminkin akuuttia vaikutusta, joka johtuu niiden siirtämisestä 30 °C:sta 22 °C:seen poistopäivänä (hiiret kokivat tämän 5–10 minuuttia ennen lentoonlähtöä). .).
Tutkimuksemme yleinen rajoitus on, että tutkimme vain uroshiiriä.Muut tutkimukset viittaavat siihen, että sukupuoli voi olla tärkeä näkökohta ensisijaisissa indikaatioissamme, sillä yksipolviiset naarashiiret ovat herkempiä lämpötiloille korkeamman lämmönjohtavuuden ja tiukemmin kontrolloidun ydinlämpötilojen ylläpitämisen ansiosta.Lisäksi naarashiiret (HFD: llä) osoittivat suuremman energian saanti -assosiaation EE: n kanssa 30 ° C: ssa verrattuna uroshiiriin, jotka käyttivät enemmän saman sukupuolen hiiriä (tässä tapauksessa 20 ° C) 20.Siten naarashiirillä subthermonetral-pitoisuus on suurempi, mutta sillä on sama kuvio kuin uroshiirillä.Tutkimuksessamme keskityimme yhden polven uroshiiriin, koska nämä ovat olosuhteet, joissa suurin osa EE: n tutkivista metabolisista tutkimuksista suoritetaan.Toinen tutkimuksemme rajoitus oli se, että hiiret olivat samalla ruokavaliolla koko tutkimuksen ajan, mikä sulki pois huonelämpötilan merkityksen tutkimisen aineenvaihdunnan joustavuuden kannalta (mitattu RER-muutoksilla ruokavalion muutoksille eri makroravinnekoostumuksissa).Naaras- ja uroshiirissä, joita pidetään 20 ° C: ssa verrattuna vastaaviin hiiriin, joita pidetään 30 ° C: ssa.
Yhteenvetona voidaan todeta, että tutkimuksemme osoittaa, että kuten muissa tutkimuksissa, kierros 1 normaalipainoiset hiiret ovat termoneutraalia ennustetun 27,5 ° C: n yläpuolella.Lisäksi tutkimuksemme osoittaa, että liikalihavuus ei ole merkittävä eristävä tekijä hiirillä, joilla on normaalipainoinen tai DIO, mikä johtaa samanlaisiin lämpötila:EE-suhteisiin DIO- ja normaalipainoisilla hiirillä.Vaikka normaalipainoisten hiirten ravinnon saanti oli yhdenmukainen EE:n kanssa ja säilytti siten vakaan ruumiinpainon koko lämpötila-alueella, DIO-hiirten ravinnon saanti oli sama eri lämpötiloissa, mikä johti korkeampaan hiirten suhteeseen 30 °C:ssa. .22°C:ssa lihonut enemmän.Kaiken kaikkiaan systemaattiset tutkimukset, joissa tarkastellaan lämpöneutraalin lämpötilan alapuolella elämisen mahdollista merkitystä, ovat perusteltuja, koska usein havaitaan huonon siedettävyyden hiiri- ja ihmistutkimusten välillä.Esimerkiksi liikalihavuustutkimuksissa osittainen selitys yleisesti huonommalle käännettävyydelle voi johtua siitä, että hiiren painonpudotustutkimukset suoritetaan yleensä kohtalaisen kylmästressissä oleville eläimille, joita pidetään huoneenlämmössä niiden kohonneen EE:n vuoksi.Liioiteltu painonpudotus verrattuna henkilön oletettuun ruumiinpainoon, varsinkin jos vaikutusmekanismi riippuu EE:n lisäämisestä lisäämällä BAP:n aktiivisuutta, joka on aktiivisempi ja aktivoituu huoneenlämmössä kuin 30°C:ssa.
Tanskan eläinkoelain (1987) ja National Institutes of Healthin (julkaisu nro 85-23) ja kokeellisiin ja muihin tieteellisiin tarkoituksiin käytettävien selkärankaisten suojelua koskevan eurooppalaisen yleissopimuksen (Euroopan neuvosto nro 123, Strasbourg) mukaisesti , 1985).
Kaksikymmentäviikkoisia urospuolisia C57BL/6J-hiiriä saatiin Janvier Saint Berthevin Cedexiltä, Ranskasta, ja heille annettiin Ad libitum-standardi Chow (Altromin 1324) ja vesi (~ 22 ° C) 12:12 tunnin valon jälkeen: tumma sykli.huonelämpötila.Urospuoliset DIO-hiiret (20 viikkoa) hankittiin samalta toimittajalta, ja niille annettiin ad libitum pääsy 45 % rasvaiseen ruokavalioon (luettelonro D12451, Research Diet Inc., NJ, USA) ja veteen kasvatusolosuhteissa.Hiiret mukautettiin ympäristöön viikkoa ennen tutkimuksen alkamista.Kaksi päivää ennen siirtoa epäsuoraan kalorimetrijärjestelmään hiiret punnittiin, niille tehtiin MRI-skannaus (EchoMRITM, TX, USA) ja jaettiin neljään ryhmään, jotka vastaavat ruumiinpainoa, rasvaa ja normaalia ruumiinpainoa.
Graafinen kaavio tutkimussuunnitelmasta on esitetty kuvassa 8. Hiiret siirrettiin suljettuun ja lämpötilasäädeltyyn epäsuoraan kalorimetrijärjestelmään Sable Systems Internationalsissa (Nevada, USA), joka sisälsi ruoan ja veden laatumittarit sekä Promethion BZ1 -kehyksen, joka tallensi. aktiivisuustasoja mittaamalla säteen katkokset.XYZ.Hiiret (n = 8) pidettiin yksittäin 22, 25, 27,5 tai 30 °C:ssa käyttämällä kuivikkeita, mutta ilman suojaa ja pesimämateriaalia 12:12 tunnin valo-pimeä-jaksolla (valo: 06:00-18:00) .2500 ml/min.Hiiriä sopeutettiin 7 päivää ennen rekisteröintiä.Tallenteita kerättiin neljänä päivänä peräkkäin.Sillä välin 22 °C:ssa pidettyjä hiiriryhmiä pidettiin tässä lämpötilassa vielä kaksi päivää (uusien perustietojen keräämiseksi), minkä jälkeen lämpötilaa nostettiin 2 °C:n välein joka toinen päivä valovaiheen alussa ( 06:00) Siihen saakka, kunnes saavutettiin 30 ° C sen jälkeen, lämpötila laski 22 ° C: seen ja tiedot kerättiin vielä kahden päivän ajan.Kahden lisäpäivän tallennuksen jälkeen 22 °C:ssa ihot lisättiin kaikkiin soluihin kaikissa lämpötiloissa, ja tietojen kerääminen aloitettiin toisena päivänä (päivä 17) ja kolmen päivän ajan.Sen jälkeen (päivä 20) pesimämateriaalia (8-10 g) lisättiin kaikkiin soluihin valosyklin alussa (06:00) ja tietoja kerättiin vielä kolmen päivän ajan.Siten tutkimuksen lopussa 22 °C:ssa pidettyjä hiiriä pidettiin tässä lämpötilassa 21/33 päivää ja 22 °C:ssa viimeiset 8 päivää, kun taas muissa lämpötiloissa olevia hiiriä pidettiin tässä lämpötilassa 33 päivää./33 päivää.Hiiriä ruokittiin tutkimusjakson aikana.
Normaalipainoiset ja DIO-hiiret seurasivat samoja tutkimusmenetelmiä.Päivänä -9 hiiret punnittiin, MRI skannattiin ja jaettiin ryhmiin, jotka olivat vertailukelpoisia ruumiinpainoltaan ja kehon koostumukseltaan.Päivänä -7 hiiret siirrettiin suljettuun lämpötilasäädeltyyn epäsuoraan kalorimetriajärjestelmään, jota valmistaa SABLE Systems International (Nevada, USA).Hiiret sijoitettiin yksittäin vuodevaatteiden kanssa, mutta ilman pesimä- tai suojamateriaaleja.Lämpötila asetetaan 22, 25, 27,5 tai 30 ° C.Yhden viikon sopeutumisen jälkeen (päivät -7 - 0, eläimiä ei häiritty) kerättiin tiedot neljänä peräkkäisenä päivänä (päivät 0 - 4, tiedot esitetään kuvioissa 1, 2, 5).Sen jälkeen hiiriä, joita pidettiin 25, 27,5 ja 30 °C:ssa, pidettiin vakio-olosuhteissa 17. päivään asti.Samaan aikaan 22°C ryhmän lämpötilaa nostettiin 2°C välein joka toinen päivä säätämällä lämpötilasykliä (06:00 h) valoaltistuksen alussa (tiedot on esitetty kuvassa 1). .Päivänä 15 lämpötila laski 22 °C:seen, ja kahden päivän tiedot kerättiin perustietojen saamiseksi myöhempiä hoitoja varten.Nahat lisättiin kaikkiin hiiriin päivänä 17 ja pesimämateriaali lisättiin päivänä 20 (kuvio 5).23. päivänä hiiret punnittiin ja niille tehtiin MRI-skannaus ja jätettiin sitten rauhaan 24 tunniksi.Päivänä 24 hiiret paastottiin valojakson alusta (06.00) ja saivat OGTT:tä (2 g/kg) klo 12.00 (6-7 tunnin paasto).Sen jälkeen hiiret palautettiin vastaaviin soopeli -olosuhteisiinsa ja lopetettiin toisena päivänä (päivä 25).
DIO-hiiret (n = 8) noudattivat samaa protokollaa kuin normaalipainoiset hiiret (kuten yllä ja kuviossa 8 on kuvattu).Hiiret säilyttivät 45 % HFD:n koko energiankulutuskokeen ajan.
VO2 ja VCO2 sekä vesihöyryn paine rekisteröitiin 1 Hz:n taajuudella kennon aikavakiolla 2,5 minuuttia.Ruoan ja veden saanti kerättiin tallentamalla jatkuvasti (1 Hz) ruoka- ja vesiastioiden painoa.Käytetty laatumonitori ilmoitti resoluutioksi 0,002 g.Aktiivisuustasot tallennettiin käyttämällä 3D XYZ -säderyhmämonitoria, tiedot kerättiin sisäisellä 240 Hz:n resoluutiolla ja raportoitiin joka sekunti kuljetun kokonaismatkan (m) kvantifioimiseksi tehokkaalla spatiaalisella resoluutiolla 0,25 cm.Tiedot käsiteltiin Sable Systems -makrotulkilla v.2.41, laskemalla EE ja RER ja suodattaen poikkeavuudet (esim. Väärät ateriatapahtumat).Makrotulkki on määritetty antamaan kaikkien parametrien tiedot viiden minuutin välein.
EE:n säätelyn lisäksi ympäristön lämpötila voi säädellä myös muita aineenvaihdunnan näkökohtia, mukaan lukien aterian jälkeistä glukoosiaineenvaihduntaa, säätelemällä glukoosia metaboloivien hormonien eritystä.Tämän hypoteesin testaamiseksi saimme lopulta päätökseen ruumiinlämpötutkimuksen provosoimalla normaalipainoisia hiiriä DIO-oraalisella glukoosikuormalla (2 g/kg).Menetelmät on kuvattu yksityiskohtaisesti lisämateriaaleissa.
Tutkimuksen lopussa (päivä 25) hiiret paastottiin 2-3 tuntia (alkaen klo 06.00), nukutettu isofluraanilla ja vuotanut kokonaan retroorbitaalisen laskimeen.Plasman lipidien ja hormonien ja lipidien kvantifiointi maksassa on kuvattu lisämateriaaleissa.
Sen tutkimiseksi, aiheuttaako kuoren lämpötila rasvakudoksessa sisäisiä muutoksia, jotka vaikuttavat lipolyysiin, hiiristä leikattiin nivus- ja lisäkiveskudosta suoraan verenvuodon viimeisen vaiheen jälkeen.Kudokset käsiteltiin käyttämällä äskettäin kehitettyä ex vivo -lipolyysimääritystä, joka on kuvattu lisämenetelmissä.
Ruskea rasvakudos (BAT) kerättiin tutkimuksen päättymispäivänä ja käsiteltiin lisämenetelmissä kuvatulla tavalla.
Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM.Kaaviot luotiin GraphPad Prism 9: ssä (La Jolla, CA) ja grafiikkaa muokattiin Adobe Illustratorissa (Adobe Systems Incorporated, San Jose, CA).Tilastollinen merkitsevyys arvioitiin GraphPad Prismissa ja testattiin pareillisella t-testillä, toistuvilla mittauksilla yksisuuntaisella/kaksisuuntaisella ANOVA:lla, jota seurasi Tukeyn useiden vertailujen testi, tai parittomalla yksisuuntaisella ANOVA:lla, jota seurasi Tukeyn useiden vertailujen testi tarvittaessa.Datan Gaussin jakauma validoitiin D'Agostino-Pearson-normaalisuustestillä ennen testausta.Otoskoko on ilmoitettu Tulokset-osion vastaavassa osiossa sekä selityksessä.Toisto määritellään mitkä tahansa samasta eläimestä (in vivo tai kudosnäytteestä) tehdyksi mittaukseksi.Tietojen toistettavuuden kannalta yhteys energiankulutuksen ja tapauksen lämpötilan välillä osoitettiin neljässä riippumattomassa tutkimuksessa, joissa käytettiin erilaisia hiiriä, joilla oli samanlainen tutkimussuunnitelma.
Yksityiskohtaiset kokeelliset protokollat, materiaalit ja raakatiedot ovat saatavilla kohtuullisesta pyynnöstä pääkirjailija Rune E. Kuhrelta.Tämä tutkimus ei tuottanut uusia ainutlaatuisia reagensseja, siirtogeenisiä eläin-/solulinjoja tai sekvensointitietoja.
Lisätietoja tutkimussuunnittelusta on tähän artikkeliin linkitetyssä Nature Research Reportin tiivistelmässä.
Kaikki tiedot muodostavat kaavion.ESM:ssä näkyvät tiedot voidaan lähettää Rune E Kuhrelle kohtuullisen testauksen jälkeen.
Nilsson, C., Raun, K., Yan, FF, Larsen, MO & Tang-Christensen, M. Laboratorioeläimet ihmisen liikalihavuuden korvaavina malleina. Nilsson, C., Raun, K., Yan, FF, Larsen, MO & Tang-Christensen, M. Laboratorioeläimet ihmisen liikalihavuuden korvaavina malleina.Nilsson K, Raun K, Yang FF, Larsen MO.ja Tang-Christensen M. Laboratorioeläimet ihmisen liikalihavuuden korvaavina malleina. Nilsson, C., Raun, K., Yan, FF, Larsen, MO & Tang-Christensen, M. 实验动物作为人类肥胖的替代模型。 Nilsson, C., Raun, K., Yan, FF, Larsen, MO & Tang-Christensen, M. Koeeläimet korvikemallina ihmisille.Nilsson K, Raun K, Yang FF, Larsen MO.ja Tang-Christensen M. Laboratorioeläimet ihmisten liikalihavuuden korvikemalleina.Acta Pharmacology.rikos 33, 173–181 (2012).
Gilpin, DA Uuden Mie-vakion laskenta ja palamiskoon kokeellinen määritys.Burns 22, 607-611 (1996).
Gordon, SJ Hiiren lämmönsäätelyjärjestelmä: sen vaikutukset biolääketieteellisen tiedon siirtoon ihmisille.fysiologia.Käyttäytyminen.179, 55-66 (2017).
Fischer, AW, Csikasz, RI, Von Essen, G., Cannon, B. & Nedegaard, J. Lihavuuden eristävää vaikutusta. Fischer, AW, Csikasz, RI, Von Essen, G., Cannon, B. & Nedegaard, J. Lihavuuden eristävää vaikutusta.Fischer AW, Chikash RI, von Essen G., Cannon B. ja Nedergaard J. Ei liikalihavuuden eristysvaikutusta. Fischer, AW, Csikasz, RI, von Essen, G., Cannon, B. & Nedergaard, J. 肥胖没有绝缘作用. Fischer, AW, Csikasz, RI, von Essen, G., Cannon, B. & Nedergaard, J. Fischer, AW, Csikasz, RI, Von Essen, G., Cannon, B. & Nedegaard, J. жирение не имет изолирющего эеекта. Fischer, AW, Csikasz, RI, von Essen, G., Cannon, B. & Nedergaard, J. Lihavuudella ei ole eristävää vaikutusta.Joo.J. Physiology.endokriininen.aineenvaihduntaa.311, E202–E213 (2016).
Lee, P. et ai.Lämpötilaan mukautettu ruskea rasvakudos moduloi insuliiniherkkyyttä.Diabetes 63, 3686–3698 (2014).
Nakhon, KJ et ai.Alempi kriittinen lämpötila ja kylmän aiheuttama termogeneesi olivat käänteisesti suhteessa ruumiinpainoon ja perusaineenvaihduntaan laihoilla ja ylipainoisilla yksilöillä.J. Lämpimästi.biologia.69, 238–248 (2017).
Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. Optimaaliset asumislämpötilat hiirille jäljittelemään ihmisten lämpöympäristöä: kokeellinen tutkimus. Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. Optimaaliset asumislämpötilat hiirille jäljittelemään ihmisten lämpöympäristöä: kokeellinen tutkimus.Fischer, AW, Cannon, B. ja Nedegaard, J. Hiirien optimaaliset talon lämpötilat ihmisen lämpöympäristön jäljittelemiseksi: kokeellinen tutkimus. Fischer, AW, Cannon, B. & Nedegaard, J. 小鼠 模拟 人类 热 的 最 佳 住房 温度 ： 一 项 实验 研究。。。。。。。。 Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J.Fisher AW, Cannon B. ja Nedegaard J. Optimaalinen koteloiden lämpötila hiirille, jotka simuloivat ihmisen lämpöympäristöä: kokeellinen tutkimus.Moore.aineenvaihduntaa.7, 161–170 (2018).
Keijer, J., Li, M. & Speakman, Jr Mikä on paras asumislämpötila hiirikokeiden kääntämiseksi ihmisille? Keijer, J., Li, M. & Speakman, Jr Mikä on paras asumislämpötila hiirikokeiden kääntämiseksi ihmisille?Keyer J, Lee M ja Speakman Jr Mikä on paras huoneenlämpöinen hiiren kokeiden siirtämiseksi ihmisille? Keijer, J., Li, M. & Speakman, JR 将小鼠实验转化为人类的最佳外壳温度是多少？ Keijer, J., Li, M. & Speakman, JRKeyer J, Lee M ja Speakman Jr Mikä on optimaalinen kuoren lämpötila hiiren kokeiden siirtämiseksi ihmisille?Moore.aineenvaihduntaa.25, 168–176 (2019).
Seeley, RJ & MacDougald, OA Hiiret kokeellisina malleina ihmisen fysiologiaan: kun useita asteita asunnon lämpötilassa on väliä. Seeley, RJ & MacDougald, OA Hiiret kokeellisina malleina ihmisen fysiologiaan: kun useita asteita asunnon lämpötilassa on väliä. Seeley, RJ & MacDougald, OA Мыши как экспериментальные модели для физиологии человека: когда несколько градусов когда несколько градусов. Seeley, RJ & MacDougald, OA Hiiret kokeellisina malleina ihmisen fysiologiaan: kun muutama aste asunnossa vaikuttaa. Seeley, RJ & MacDougald, OA 小鼠作为人类生理学的实验模型：当几度的住房温度很重要旦很重要 Seeley, RJ & MacDougald, OA Мыши Seeley, RJ & MacDougald, OA как экспериментальная модель физиологии человека: когда несколько градусов темыпературю. Seeley, RJ & MacDougald, OA hiiret ihmisen fysiologian kokeellisena mallina: kun muutaman asteen huoneenlämpötilalla on merkitystä.Kansallinen aineenvaihdunta.3, 443–445 (2021).
Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. Vastaus kysymykseen "Mikä on paras asumislämpötila kääntää hiiren kokeet ihmisille?" Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. Vastaus kysymykseen "Mikä on paras asumislämpötila kääntää hiiren kokeet ihmisille?" Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. Vastaus kysymykseen "Mikä on paras huonelämpötila hiirikokeiden siirtämiseen ihmisiin?" Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J. 问题的答案"将小鼠实验转化为人类的最佳外壳温度是够" Fischer, AW, Cannon, B. & Nedergaard, J.Fisher AW, Cannon B. ja Nedergaard J. vastaavat kysymykseen "Mikä on optimaalinen kuoren lämpötila hiirikokeiden siirtämiseksi ihmisiin?"Kyllä: lämpöneutraali.Moore.aineenvaihduntaa.26, 1-3 (2019).
Postitusaika: 28.10.2022